跟著小編從四大方向探討液相色譜儀
液相色譜儀有四方面重要的作用,今天小編就來和大家探討一下這個知識點。
一、醫(yī)藥方面
①分離分析藥物的組合含量:由于一種藥劑常含有多組分,色譜方法是既能分離又能定量的方法。如脂溶性維生素片,含有鉻維生素,有C18柱及含1%碳酸銨的甲醇為流動相。一次即可將各維生素B6、D1、A、E同時分離并定出含量。又如止痛藥或退燒藥也可用此法分離并測得各組分的含量。
②藥物生產(chǎn)中進(jìn)行中間控制:生產(chǎn)抗菌素時,首先要了解發(fā)酵液中的主體與付產(chǎn)物的存在情況。例如:青霉素、四環(huán)素、頭孢子菌素、紅霉素、柔紅霉素、慶大霉素等的發(fā)酵產(chǎn)物,均可用C18柱和甲醇及緩沖液配制的流動相或用離子對法,分析主體及其收產(chǎn)物的含量。對普魯卡因酰胺、茶堿等可進(jìn)行主體含量的測定,對硝酸甘油可測定主體含量及其降解產(chǎn)物,以便保證藥物的熱量。
③分析藥物在體內(nèi)的殘量:這是近來研究新藥效能很主要的內(nèi)容之一,如冬凌草甲素是植物中的一組分,有抗癌效果,但是毒性大。測定其在血清中含量很重要,現(xiàn)在可用C18柱及甲醇水為流動相,測定處理后的血清樣品,即可得到血中的含量。如磺胺類藥品在血清及尿中含量也不允許太大,液相色譜儀可用C18柱及酸性乙醇為流動相,測定含量后,則可估計合適的用藥劑量。又如四環(huán)素、巴比妥酸、止痛藥、退燒藥、護(hù)糖尿病的藥物等,在血或尿中的含量都可用C18柱用甲醇、水為流動相來測定含量。因此,反相色譜法應(yīng)用范圍極廣。
④測定藥物在各種器官中的代謝產(chǎn)物,特別是研究藥物的代謝產(chǎn)物在血清中存在的情況。如測血清中的酮酸及戊二酸。測尿中代謝產(chǎn)物更為方便,不需要繁鎖的預(yù)處理。因為研究尿中的組分能鑒別病人的代謝功能,對病理研究或監(jiān)床診斷均具有重要的參考價值。
二、生化方面
主要方向是分析嘌呤、嘧啶基的核甙或核甙酸及具有相應(yīng)的肽和蛋白質(zhì)。
①在細(xì)胞核中有種類繁多的甙及核甙酸,可用不同的檢測器或酶轉(zhuǎn)移檢測器或利用酶反應(yīng)進(jìn)行定性測定。用離子交換柱和緩沖游泳梯度淋洗。C18柱用含磷酸的緩沖水溶液的梯度淋洗法均能得到滿意的結(jié)果。
②分析核酸近年來有關(guān)分析核酸的研究很多,主要是分離RNA、DNA及碎片。現(xiàn)在使用硅烷化的硅藻土或長碳鏈季胺鹽涂漬=在上面制成系列填充柱。已能分離t-RNA,r-RNA及DNV碎片。有沒的緩沖液淋洗,還可利用此技術(shù)做RNA碎片的序列分離制備工具,對生物研究起了重要的作用。
③氨基酸、肽、蛋白質(zhì)的分析,氨基酸分析主要是制成熒光衍生物或酰氯的衍生物,然后測定其序列。近來也可用液相色譜的柱后衍生物法測定其序列。操作簡便、速度快、深受歡迎。用四烷基氯化胺肽形成離子對或凝膠色譜測定蛋白質(zhì),其分離效果也很好。
(補(bǔ)充下:氨基酸用液相檢測,需用柱前衍生法和柱后衍生法來處理樣品,可參照《氨基酸色譜分離方法簡析》)液相色譜儀
④酶的分析,酶是在血清及其他生理樣品中常有的反應(yīng)產(chǎn)物,化學(xué)分析法操作不便,易造成誤差,用色譜技術(shù)分析,具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確的特點。如測定堿性或酸性磷酸酶的含量,測定反應(yīng)產(chǎn)物中腺甙脫 胺酶的含量等,目前對酶用色譜法分離分析的研究工作已開展很多。
⑤糖的分析,糖的分析是其它方法較難完成的。如把糖與硼酸緩沖液預(yù)選混合,使生成糖-硼酸絡(luò)合離子,再進(jìn)行分離。可把蔗乳糖、阿蘆糖、果糖、阿拉伯糖、巖藻糖、半乳糖、山梨糖、木糖、葡萄糖等幾十種,全部分開。也可用胺基柱分離各種天然產(chǎn)物中伯糖的各繃分。
三、天然產(chǎn)物中主要組分的分析
天然物的組分非常復(fù)雜,如中草藥中各組分含量多少對藥劑作用影響很大。用此技術(shù)分離分析,具有簡便、快速的特點。氨基柱能分離分析天然物中糖的組分。氰基柱能分離中藥紫草及其衍生物的組成。硅膠柱能測定成藥中馬錢了堿、苦堿等含量。C18柱分離丹參中主要組分兒茶酚、桂皮中桂皮酸、煙草中的酚類化合物、麥角或鴉片中各種植物堿,這些都是近來日益受到重視的結(jié)果。
以植提行業(yè)為例,涉及的成分大致可分為以下幾大類:
1.生物堿類:即植物堿,一種堿性含氮有機(jī)化合物,有顯著的生物活性或毒性,是中草藥重要的有效成分。
2.黃酮類:黃酮類化合物廣泛存在于植物的各個部位,尤其是花、葉部位, 約20%的中草藥中都含有黃酮類化合物,資源豐富。
3.多糖類:大于10個單糖組成的多糖化合物。如淀粉、纖維素
4.苷類:糖與一種物質(zhì)(酚類、黃酮類)結(jié)合而成的物質(zhì)
5.有機(jī)酸類
6.發(fā)油類:具有揮發(fā)性,可隨水蒸汽蒸餾出來的油狀液體,大部分具有香氣
該行業(yè)均有使用到液相(分析成分,含量),氣相(分析成分,含量,農(nóng)殘)及質(zhì)譜等儀器的潛力,但不同規(guī)模的企業(yè)對儀器的需求差別很大。目前國家沒有針對性的標(biāo)準(zhǔn),主要以國家標(biāo)準(zhǔn)(2010版)為參考。
四、食品分析
分析食品或動物飼料中的嘌維生素含量,是當(dāng)前食品工業(yè)中的重要課題。分析食品中的黃曲霉素及各種香料,又是生產(chǎn)中的常用課題。如今此技術(shù)已在分析咖啡中的黃嘌泠、調(diào)料中的核甙酸及核甙、果汁中的有機(jī)酸、米中的維生素、牛奶中的維生素D等都對食品營養(yǎng)價值提供有效數(shù)據(jù)。
液相色譜儀分析食品中比如蘋果中農(nóng)藥萘乙酸、牛奶中的有毒成分。